如何提高液相色譜柱柱效呢?
以下介紹了幾種上流行的測量和計算柱效值的方法。
1、提高
液相色譜柱柱效的方法
我們知道色譜峰的擴寬與移動相在熱力學的分配過程、移動相和固定相中傳質(zhì)阻力
所引起的不平衡有關,譜峰擴寬(非平衡)的程度是流速對傳質(zhì)速率的直接函數(shù)。要提
高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。
?。?)降低移動相的流速,但會使分析時間延長。
?。?)減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負載量也隨之減小。
?。?)減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會減小。
?。?)選用低粘度的移動相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析。
?。?)適當提高柱溫,可降低移動相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低。
?。?)盡量減小停滯移動相的體積,但卻加快了移動相的流速。
從以上介紹可看出,在色譜分析過程中,各種因素是互相和制約的。只有通過對
柱效值的跟蹤測算,對自己分析方法不斷的研究和實踐,才能找到*的工作條件。
2、對
柱效值進行跟蹤測算應注意的問題
我們也應記住柱效值即塔板數(shù)只表示該色譜柱裝填的好壞,只用柱效值并不足以預測
在所有條件下的柱性能,因為在這些條件下,柱性能主要表示動力學過程對色譜柱譜
帶加寬的量。其他一些影響峰寬的因素,如柱外效應和熱力學因素(通常表現(xiàn)為峰拖
尾),在理想情況下對于確定柱效值并不起重要作用。因為任何一個柱性能的定義都
必然與用此色譜柱所做的分離相,所以依據(jù)一個單獨的數(shù)字來評定柱性能是不切
實際的。對大多數(shù)色譜工作者來說,柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力,而僅
僅有高柱效并不能保證這種分離能力。
不管用什么特定的測試方法,都會有幾個參數(shù)影響柱效的測定。這些參數(shù)包括:洗脫
液的成分和粘度及其線流速,測定塔板數(shù)所用的溶質(zhì),溫度,柱長,填料裝填方式,顆粒
度,還有所選用的測量和計算方法。盡管大多數(shù)柱效測算沒有設法消除液相色譜儀器
系統(tǒng)各部件對表觀峰寬的影響,但只要儀器是正常使用的,這些影響是次要的。而測
量和計算方法對柱效值的確定起著極大的作用。
3、幾種測量和計算柱效值的方法
因為
色譜峰是假定樣品濃度在移動相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,
故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數(shù)。因此計算柱效(以理論塔板數(shù)n
為單位)的公式習慣上定義為:
式中tR為色譜峰的保留時間;σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差;a是和峰高(從
測峰寬的基線量起)有關的常數(shù),ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側拐點處
做切線與峰底基線相交兩點間的距離?! ?br /> 4、結論
假如一個色譜峰真是正態(tài)峰型,那么每種計算方法都會得到同樣的結果。然而即使一
些比較理想的儀器和傾向于得到對稱峰型的溶質(zhì),由于柱內(nèi)的槽或空隙,也會出現(xiàn)非
正態(tài)峰型。所以不同的計算方法將會得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型
表示為“前延”或“拖尾”。對于這些峰型,越在峰的高處測量,計算的理論塔板數(shù)
值就越大(準確性越低)。在許多情況下,色譜工作者需要能反映整個峰型(包括拖尾)
的柱效值,同時為了保證定量的重復性,也需要色譜峰很好的對稱性。這時對色譜峰
非對稱性zui敏感的計算方法。如果目的
僅僅是要監(jiān)測色譜柱從*次使用到使用壽命結束這一過程中的柱效,那么以上任何
一種方法都可以,應選擇zui簡便的方法。