陰離子交換色譜柱的再生方法你了解幾種?
更新時(shí)間:2018-10-18 點(diǎn)擊次數(shù):6404
陰離子交換色譜柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán),這些帶電基團(tuán)通過(guò)靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子,按照質(zhì)量作用定律,這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。
陰離子交換色譜柱基本原理:
離子交換色譜是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合,這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的,在改變pH或者用逐漸增加離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫時(shí),離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來(lái)。
陰離子交換色譜柱的再生方法有兩種:
?。?)先用25ml蒸餾水通過(guò)柱子以除去緩沖鹽類,再用25ml甲醇沖洗,以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì),再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類,后用緩沖液平衡。
?。?)先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌,然后用水洗滌(不要用堿性溶液,以防硅膠基質(zhì)溶解),后用緩沖液平衡。
陰離子交換色譜柱的操作壓力是不能超過(guò)色譜柱說(shuō)明書中規(guī)定的大壓力的,否則會(huì)造成色譜不可逆損失。
離子色譜柱的啟動(dòng) 采用標(biāo)準(zhǔn)淋洗液(一般指等淋洗條件)使淋洗達(dá)到平衡后,進(jìn)行色譜標(biāo)準(zhǔn)陰離子的測(cè)試分離度和重視性。
爐子子色譜柱的儲(chǔ)放 一般情況下,可以采用標(biāo)準(zhǔn)淋洗液作為儲(chǔ)備液,長(zhǎng)期儲(chǔ)備需要將色譜柱兩端密封。但對(duì)于非抑制型離子色譜柱或早期的抑制型離子色譜柱,由于所有淋洗液比較接近中性,用淋洗液儲(chǔ)放易于長(zhǎng)霉,因此需要用高PH值的溶液作儲(chǔ)備液,或者的淋洗液中加入防霉劑作儲(chǔ)備液。